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Frontera Biotecnol%u00f3gica | N%u00b0 29 septiembre-diciembre 2024 22ISSN: 2448-8461Los siguientes reactivos se adquirieron de Sigma-Aldrich Co. LLC (st Louis, MO): acetilcolinesterasa de Electrophorus electricus, acetilcolina, reactivo de Ellman, tacrina, dimetilsulf%u00f3xido y fosfato de sodio monob%u00e1sico. Las isoflavonas preniladas (calopogonium isoflavona A, 6-metoxicalopogonium isoflavona y maxima isoflavona J) fueron sintetizadas previamente como se describe en la literatura (Hern%u00e1ndez-Guti%u00e9rrez et al., 2024).La actividad inhibitoria de AChE se determin%u00f3 empleando el m%u00e9todo colorim%u00e9trico de Ellman con algunas modificaciones (Ellman et al., 1961). La mezcla de reacci%u00f3n con 275 %u03bcL de b%u00fafer de fosfatos (0.1 M, pH 8.0), 50 %u03bcL del inhibidor (en concentraciones de 0.1 a 4.0 mM), 50 %u03bcL de sustrato acetilcolina (0.5 mM) y 25 %u03bcL de enzima AChE (5 U/mL) se incub%u00f3 a 30 %u00b0C durante 30 minutos. Posteriormente, se adicionaron 100 %u03bcL de reactivo de Ellman (2.52 mM). La absorbancia de la mezcla resultante fue registrada a 412 nm en un lector de microplacas de 96 pocillos (Multiskan%u2122 GO, Thermo Fisher Scientific). Se prepararon dos mezclas (control y blanco) empleando el disolvente DMSO y b%u00fafer de fosfatos en lugar del inhibidor. El porcentaje de inhibici%u00f3n de la actividad de AChE (%In) se calcul%u00f3 utilizando la ecuaci%u00f3n:%In={(Acontrol %u2014 Amuestra )/Acontrol }%u00d7100%donde Amuestra es la absorbancia de la muestra que contiene el compuesto isoflavona y Acontrol es la absorbancia de la mezcla de control. Todos los ensayos se realizaron por triplicado como m%u00ednimo. Se determin%u00f3 la concentraci%u00f3n de isoflavona en la mezcla necesaria para una inhibici%u00f3n del 50% de la actividad de AChE.Materiales y m%u00e9todos2.1 Materiales2.2 Determinaci%u00f3n de la actividad inhibitoria de acetilcolinesterasa