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13enero - abril 2025 Frontera Biotecnol%u00f3gica | N%u00b0 30ISSN: 2448-8461La hoja fresca de canela (C. zeylanicum) (ovalada, lanceada y de verde intenso) se colect%u00f3 de una zona de cultivo ubicada en el municipio de Cuetzalan, Puebla (20%u00ba02%u201902.4%u2019%u2019 N, 97%u00ba30%u201907.2%u2019%u2019 W), las cuales fueron identificadas taxon%u00f3micamente. El material vegetal (20 Kg) se deshidrat%u00f3 a temperatura ambiente y bajo sombra durante una semana. El fruto seco de pimienta negra (P. nigrum) (30 Kg) se adquiri%u00f3 en el mercado del municipio de Cuetzalan, Puebla. El AE de cada especie se extrajo mediante destilaci%u00f3n por arrastre de vapor (95-100 %u00b0C) utilizando un aparato de destilaci%u00f3n de acero inoxidable con capacidad de 300 litros (InoximexicoTM) durante 3 horas. Las muestras de AEs se deshidrataron con sulfato de sodio y se almacenaron en botellas de vidrio color %u00e1mbar a 4 %u00b0C.La actividad inhibitoria se determin%u00f3 por el m%u00e9todo del %u00e1cido 3,5-dinitrosalic%u00edlico (DNS). La mezcla de reacci%u00f3n conten%u00eda 100 %u03bcL de almid%u00f3n soluble al 1 % (buffer de fosfato 0.1 M, pH 6.9), 100 %u03bcL de AEs (en concentraciones de 0.1 a 10 mg/mL) y 100 %u03bcL de %u03b1-amilasa (5.0 U/mL en buffer de fosfatos 0.1 M, pH 6.9), se incub%u00f3 a 20 %u00b0C durante 3 minutos. Despu%u00e9s se agregaron 100 %u03bcL de reactivo DNS y se llev%u00f3 a ebullici%u00f3n durante 15 minutos. Finalmente se adicion%u00f3 agua destilada filtrada para completar vol%u00famenes de 1 mL y verter en las placas de 96 micropozos. La absorbancia de la mezcla resultante se determin%u00f3 en un lector de microplacas de 96 pocillos (Multiskan%u2122 GO, Thermo Fisher Scientific) a 540 nm. Se prepararon dos mezclas (control y blanco) empleando disolvente etanol y buffer de fosfatos respectivamente en lugar del inhibidor. El f%u00e1rmaco acarbosa se emple%u00f3 como control positivo (0.5 %u2013 6.5 mg/mL). El porcentaje de inhibici%u00f3n (%) de la muestra se calcul%u00f3 mediante la ecuaci%u00f3n (1):Inhibici%u00f3n (%)={(A_controlA_muestra )/A_control }%u00d7100donde Amuestra es la absorbancia de la muestra que contiene el AEs y Acontrol es la absorbancia de la mezcla control. Se determin%u00f3 la concentraci%u00f3n del AEs para una inhibici%u00f3n del 50% de actividad enzim%u00e1tica (CI50). Todos los ensayos se realizaron por triplicado (n = 4) y se analizaron estad%u00edsticamente con el software MINITAB 19.La actividad inhibitoria de acetilcolinesterasa se determin%u00f3 con el m%u00e9todo de Ellman con ligeras modificaciones (Ellman et al., 1961). La mezcla de reacci%u00f3n con 275 %u00b5L de buffer de fosfatos (0.1 M, pH 8.0), 50 %u00b5L de AEs (en concentraciones de 0.1 a 10 mg/mL), 50 %u00b5L de ACTI (0.5 M) y 25 %u00b5L de enzima acetilcolinesterasa (0.5 U/mL, en buffer de fosfatos 0.1 M, pH 8.0) se incub%u00f3 a 30 %u00b0C durante 30 minutos. Despu%u00e9s, se adicionaron 100 %u00b5L de reactivo de Ellman (DTNB, 2.52 mM). La absorbancia de la mezcla resultante se ley%u00f3 a 412 nm en un lector de microplacas (Multiskan%u2122 GO, Thermo Fisher Scientific). Se prepararon dos mezclas (control y blanco) empleando el disolvente etanol y buffer de fosfatos respectivamente en lugar del inhibidor. El f%u00e1rmaco tacrina se emple%u00f3 como control positivo (1.0 %u2013 0.001 mg/mL). Todos los ensayos se realizaron por triplicado. El porcentaje de inhibici%u00f3n (%) de la muestra se calcul%u00f3 mediante la ecuaci%u00f3n (1).2.2 Material vegetal y extracci%u00f3n del aceite esencial2.3 Efecto inhibitorio in vitro sobre %u03b1-amilasa2.4 Efecto inhibitorio in vitro sobre acetilcolinesterasa